色譜柱老化需要注意哪些細(xì)節(jié)
更新時(shí)間：2025-09-04 瀏覽次數(shù)：467
一、老化前準(zhǔn)備：避免 “先天失誤"
- 確認(rèn)色譜柱類(lèi)型，匹配老化條件
不同固定相的耐受溫度、極性差異極大，需先明確柱參數(shù)（查看柱標(biāo)或說(shuō)明書(shū)），核心關(guān)注兩個(gè)溫度：反面案例：將僅耐受 250℃的 FFAP 柱（強(qiáng)極性，用于有機(jī)酸分析）升溫至 300℃老化，會(huì)導(dǎo)致固定相嚴(yán)重流失，基線(xiàn)劇烈漂移，后續(xù)無(wú)法正常分離。 最高使用溫度（Max Operating Temp）：老化最高溫度需低于此值10-30℃（如固定相為 OV-1701 的柱最高溫 280℃，老化最高溫建議 250-270℃），防止固定相分解、流失導(dǎo)致柱效下降。
使用溫度：若為低溫固定相（如聚乙二醇類(lèi)，PEG-20M），室溫老化可能無(wú)法去除高沸點(diǎn)雜質(zhì)，需從50-80℃ 開(kāi)始升溫。
- 色譜柱連接：“斷尾接載氣，防檢測(cè)器污染"
老化時(shí)不接檢測(cè)器（如 FID、TCD、MSD），僅將色譜柱一端連接進(jìn)樣口，另一端懸空或接入廢氣管路（用管線(xiàn)導(dǎo)出室外，避免有害氣體擴(kuò)散）。
原因：老化過(guò)程中揮發(fā)的低分子固定相或雜質(zhì)若進(jìn)入檢測(cè)器，會(huì)污染檢測(cè)器（如 FID 噴嘴積碳、MSD 離子源污染），導(dǎo)致靈敏度下降、基線(xiàn)噪音增大。
連接進(jìn)樣口時(shí)，確保石墨墊密封良好（避免載氣泄漏），柱端插入進(jìn)樣口的深度符合儀器要求（通常為 4-6mm，具體看儀器說(shuō)明書(shū)）。
- 載氣選擇與純度：“高純度是底線(xiàn)"
必須使用高純度載氣：氣相色譜（GC）常用氮?dú)狻⒑猓∕SD 聯(lián)用優(yōu)先），純度需≥99.999%（5 個(gè) 9），并搭配脫氧管、脫水管（去除載氣中微量 O?和 H?O）。
禁止用空氣或氧氣老化：O?會(huì)與固定相在高溫下發(fā)生氧化反應(yīng)，破壞固定相結(jié)構(gòu)（如聚硅氧烷類(lèi)固定相斷鏈），導(dǎo)致柱效驟降、壽命縮短。
載氣流量設(shè)定：按色譜柱規(guī)格（如內(nèi)徑 0.25mm 的柱，流量通常 1-2mL/min），以 “能將雜質(zhì)帶出柱外，但不導(dǎo)致峰展寬" 為原則，老化過(guò)程中流量保持穩(wěn)定（避免波動(dòng)）。
二、升溫過(guò)程：“慢升溫 + 階梯控溫，拒絕驟升驟降"
1. 初始恒溫：“低溫除易揮發(fā)雜質(zhì)"
先將柱溫升至50-80℃（或略高于室溫 20-30℃），恒溫10-30 分鐘。
目的：去除柱內(nèi)吸附的低沸點(diǎn)雜質(zhì)（如儲(chǔ)存時(shí)進(jìn)入的空氣、水分、溶劑殘留），避免后續(xù)高溫時(shí)這些雜質(zhì)與固定相反應(yīng)。
2. 階梯升溫 / 程序升溫：“梯度除高沸點(diǎn)雜質(zhì)"
按 “每階升溫 20-30℃，恒溫 15-60 分鐘" 的節(jié)奏，逐步升至老化最高溫度（低于柱最高使用溫度 10-30℃）。
示例（以最高使用溫度 280℃的柱為例）：
50℃（恒溫 20min）→ 80℃（恒溫 20min）→ 110℃（恒溫 20min）→ ... → 250℃（恒溫 60-120min，此為最終老化溫度）。關(guān)鍵：最終老化溫度的恒溫時(shí)間需足夠長(zhǎng)（通常 30-120 分鐘，視柱長(zhǎng)和污染程度調(diào)整），直到后續(xù)基線(xiàn)穩(wěn)定（接檢測(cè)器后觀察）。
禁止 “驟升驟降"：升溫速率≤30℃/min，降溫速率≤50℃/min，防止色譜柱因熱脹冷縮產(chǎn)生物理?yè)p傷（如柱床塌陷、固定相脫落）。
三、老化中監(jiān)控：“看基線(xiàn) + 聞氣味，判斷是否完成"
- 基線(xiàn)監(jiān)控（接檢測(cè)器后）
老化后期（達(dá)到最終溫度并恒溫時(shí)），將色譜柱另一端連接檢測(cè)器，開(kāi)啟檢測(cè)器（如 FID 點(diǎn)火，MSD 調(diào)諧），觀察基線(xiàn)： 若基線(xiàn)從 “漂移劇烈、噪音大" 逐漸變?yōu)?“平穩(wěn)（噪音≤0.1mV，漂移≤0.5mV/h）"，說(shuō)明雜質(zhì)已基本去除，老化完成。
若基線(xiàn)持續(xù)漂移（如 FID 基線(xiàn)一直上升），可能是固定相仍在流失，需檢查：① 老化溫度是否過(guò)高；② 載氣是否含 O?（脫氧管失效）。
- 氣味判斷（謹(jǐn)慎操作）
老化初期（柱端懸空時(shí)），可在通風(fēng)處輕聞柱端揮發(fā)氣體： 若有 “溶劑味（如甲醇、丙酮）" 或 “焦糊味"，說(shuō)明有雜質(zhì)或固定相輕微流失，需繼續(xù)老化；
當(dāng)氣味消失，且后續(xù)基線(xiàn)穩(wěn)定，可結(jié)束老化。
* 注意：避免長(zhǎng)時(shí)間聞，部分固定相揮發(fā)物（如聚硅氧烷）有刺激性。
四、老化后降溫與保存：“防污染 + 保活性"
- 降溫操作
關(guān)閉升溫程序，待柱溫降至50-80℃（或室溫附近） 后，再關(guān)閉載氣（禁止高溫時(shí)斷載氣）。
原因：高溫時(shí)柱內(nèi)固定相處于 “活躍狀態(tài)"，斷載氣會(huì)導(dǎo)致空氣進(jìn)入柱內(nèi)，氧化固定相；低溫時(shí)固定相穩(wěn)定，可減少污染風(fēng)險(xiǎn)。
- 色譜柱保存
若短期不用（1 周內(nèi)）：保持載氣輕微流動(dòng)（0.5-1mL/min），或用密封帽封住柱兩端（防止空氣、水分進(jìn)入），存放于室溫、干燥環(huán)境。
若長(zhǎng)期不用（1 個(gè)月以上）：需再次老化后保存，或選擇與固定相兼容的溶劑（如正己烷）沖洗柱后密封（僅限填充柱，毛細(xì)管柱不建議溶劑沖洗）。
五、特殊情況處理：“不同柱型，區(qū)別對(duì)待"
- 毛細(xì)管柱 vs 填充柱
毛細(xì)管柱：固定相涂覆在柱內(nèi)壁，更易流失，老化溫度需更保守（低于最高溫 20-30℃），升溫速率更慢（≤20℃/min）。
填充柱：固定相顆粒填充，雜質(zhì)易殘留，最終老化溫度可接近最高使用溫度（低 10℃即可），恒溫時(shí)間需更長(zhǎng)（120-180 分鐘）。
- 新柱 vs 舊柱
新柱：老化需 ，最終恒溫時(shí)間延長(zhǎng)至 60-120 分鐘，確保去除生產(chǎn)時(shí)的固化劑、低分子聚合物。
舊柱（使用后污染）：若因樣品殘留導(dǎo)致柱效下降，老化前可先用 “溶劑沖洗"（如非極性柱用正己烷，極性柱用乙醇），再按常規(guī)老化流程操作，避免殘留樣品與高溫固定相反應(yīng)。
- MSD 聯(lián)用柱
老化時(shí)需特別注意： 載氣必須用氦氣（氮?dú)鈺?huì)影響 MSD 靈敏度），且純度≥99.999%；
柱端連接 MSD 時(shí)，需先在 “分流模式" 下老化（分流比 50:1 以上），避免大量雜質(zhì)進(jìn)入離子源；
老化完成后需重新調(diào)諧 MSD，確保離子源清潔。
六、常見(jiàn)誤區(qū)避坑
| 誤區(qū) | 后果 | 正確做法 |
|---|---|---|
| 老化時(shí)接檢測(cè)器 | 雜質(zhì)污染檢測(cè)器，導(dǎo)致基線(xiàn)噪音大、靈敏度下降 | 先斷檢測(cè)器，僅接進(jìn)樣口，老化后期再接檢測(cè)器監(jiān)控基線(xiàn) |
| 用氧氣 / 空氣作載氣 | 固定相氧化分解，柱效驟降，壽命縮短 | 僅用高純度氮?dú)?/ 氦氣，搭配脫氧管 |
| 一次性升至最高溫 | 局部雜質(zhì)暴沸，固定相不均勻流失，柱效波動(dòng) | 階梯升溫，每階恒溫，緩慢升至目標(biāo)溫度 |
| 新柱不老化直接用 | 基線(xiàn)漂移嚴(yán)重，分離峰形拖尾、分裂，數(shù)據(jù)不準(zhǔn) | 新柱必須老化，待基線(xiàn)穩(wěn)定后再進(jìn)樣 |